2×HotStart Taq PCR Mix

Produk ini mengandung HotStart Taq DNA polimerase, dNTPs, MgCl2, buffer reaksi, penambah PCR, pengoptimal dan penstabil, dengan konsentrasi 2×. Ini memiliki keuntungan dari kecepatan amplifikasi yang cepat, kesederhanaan, sensitivitas tinggi, spesifisitas yang kuat, stabilitas yang baik dan sejenisnya, dan dapat mengurangi kesalahan operasi hingga batas terbesar. Sangat cocok untuk reaksi PCR yang sangat spesifik, dan amplifikasi templat kompleks seperti konten GC tinggi (> 60%) atau templat dengan struktur sekunder, serta deteksi gen skala besar, dll.

Kucing. Tidak Ukuran Kemasan:
4992321 1ml
4992322 5x1ml
4992316 5×1 ml

Rincian produk

FAQ

Tag Produk

Sorotan Produk

Taq MasterMix Satu Tabung (Sertifikasi Produk Teknologi Tinggi Nasional)

2×HotStart Taq PCR MasterMix telah meningkatkan spesifisitas dan sensitivitas reaksi PCR dan dapat memperkuat templat kompleks dengan konten GC tinggi, struktur sekunder, dan sejenisnya. Serendah 2 salinan template target dapat diperkuat, memastikan hasil eksperimen yang lebih akurat.

Formula HotStart Taq MasterMix yang unik membuat seluruh sistem reaksi sangat stabil, dan aktivitasnya tidak akan terpengaruh oleh pembekuan berulang atau penyimpanan jangka panjang pada suhu 4℃ .

Solusi campuran PCR yang telah disiapkan sebelumnya yang stabil dan efisien dapat membuat operasi cepat dan sederhana, sangat mengurangi intensitas tenaga kerja dan kesalahan pengambilan sampel. Penambah dan pengoptimal PCR berkinerja tinggi juga disertakan dalam campuran, yang mengurangi persyaratan pada kondisi PCR.

Produk ini memiliki sistem yang mengandung pewarna dan bebas pewarna. Produk MasterMix yang mengandung pewarna dapat langsung dielektroforesis setelah PCR, tanpa menambahkan buffer pemuatan.

Semua produk dapat disesuaikan untuk ODM/OEM. Untuk detailnya,silahkan klik Layanan yang Disesuaikan (ODM/OEM)


  • Sebelumnya:
  • Lanjut:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    T: Tidak ada pita amplifikasi

    Template A-1

    Templat mengandung pengotor protein atau penghambat Taq, dll. ——Memurnikan templat DNA, menghilangkan pengotor protein atau mengekstrak DNA templat dengan kit pemurnian.

    Denaturasi template tidak lengkap ——Secara tepat meningkatkan suhu denaturasi dan memperpanjang waktu denaturasi.

    Degradasi template ——Siapkan ulang template.

    A-2 Primer

    Kualitas primer yang buruk ——Mensintesis ulang primer.

    Degradasi primer ——Alikuot primer konsentrasi tinggi ke dalam volume kecil untuk pengawetan. Hindari pembekuan dan pencairan berulang kali atau kriopreservasi 4°C jangka panjang.

    Desain primer yang tidak tepat (misalnya panjang primer tidak cukup, dimer terbentuk di antara primer, dll.) -Desain ulang primer (hindari pembentukan dimer primer dan struktur sekunder)

    A-3 Mg2+konsentrasi

    Mg2+ konsentrasi terlalu rendah ——Meningkatkan Mg . dengan benar2+ konsentrasi: Optimalkan Mg2+ konsentrasi dengan serangkaian reaksi dari 1 mM sampai 3 mM dengan interval 0,5 mM untuk menentukan Mg optimal2+ konsentrasi untuk setiap template dan primer.

    A-4 Suhu anil

    Temperatur annealing yang tinggi mempengaruhi pengikatan primer dan template. ——Kurangi suhu annealing dan optimalkan kondisi dengan gradien 2°C.

    A-5 Perpanjangan waktu

    Waktu perpanjangan singkat——Meningkatkan waktu perpanjangan.

    T: Positif palsu

    Fenomena: Sampel negatif juga menunjukkan pita urutan target.

    A-1 Kontaminasi PCR

    Kontaminasi silang dari rangkaian target atau produk amplifikasi —— Hati-hati jangan sampai mem-pipet sampel yang mengandung urutan target dalam sampel negatif atau menumpahkannya keluar dari tabung sentrifus. Reagen atau peralatan harus diautoklaf untuk menghilangkan asam nukleat yang ada, dan keberadaan kontaminasi harus ditentukan melalui eksperimen kontrol negatif.

    Kontaminasi reagen ——Alikuot reagen dan simpan pada suhu rendah.

    A-2 Perdanar

    Mg2+ konsentrasi terlalu rendah ——Meningkatkan Mg . dengan benar2+ konsentrasi: Optimalkan Mg2+ konsentrasi dengan serangkaian reaksi dari 1 mM sampai 3 mM dengan interval 0,5 mM untuk menentukan Mg optimal2+ konsentrasi untuk setiap template dan primer.

    Desain primer yang tidak tepat, dan urutan target memiliki homologi dengan urutan non-target. ——Desain ulang primer.

    T: Amplifikasi non-spesifik

    Fenomena: Pita amplifikasi PCR tidak konsisten dengan ukuran yang diharapkan, baik besar atau kecil, atau kadang-kadang terjadi pita amplifikasi spesifik dan pita amplifikasi non-spesifik.

    A-1 Primer

    Spesifisitas primer yang buruk

    ——Desain ulang primer.

    Konsentrasi primer terlalu tinggi ——Meningkatkan suhu denaturasi dengan benar dan memperpanjang waktu denaturasi.

    A-2 Mg2+ konsentrasi

    Mg2+ konsentrasi terlalu tinggi —— Kurangi konsentrasi Mg2+ dengan benar: Optimalkan Mg2+ konsentrasi dengan serangkaian reaksi dari 1 mM sampai 3 mM dengan interval 0,5 mM untuk menentukan Mg optimal2+ konsentrasi untuk setiap template dan primer.

    A-3 polimerase termostabil

    Jumlah enzim yang berlebihan ——Kurangi jumlah enzim secara tepat pada interval 0,5 U.

    A-4 Suhu anil

    Suhu anil terlalu rendah ——Secara tepat meningkatkan suhu anil atau mengadopsi metode anil dua tahap

    Siklus PCR A-5

    Terlalu banyak siklus PCR ——Kurangi jumlah siklus PCR.

    T: Pita tambal sulam atau noda

    A-1 Primer——Kekhususan yang buruk ——Desain ulang primer, ubah posisi dan panjang primer untuk meningkatkan spesifisitasnya; atau melakukan PCR bersarang.

    A-2 Template DNA

    ——Templat tidak murni ——Memurnikan templat atau mengekstrak DNA dengan kit pemurnian.

    A-3 Mg2+ konsentrasi

    ——Mg2+ konsentrasi terlalu tinggi ——Reduksi Mg . dengan benar2+ konsentrasi: Optimalkan Mg2+ konsentrasi dengan serangkaian reaksi dari 1 mM sampai 3 mM dengan interval 0,5 mM untuk menentukan Mg optimal2+ konsentrasi untuk setiap template dan primer.

    A-4 dNTP

    ——Konsentrasi dNTP terlalu tinggi ——Kurangi konsentrasi dNTP dengan tepat

    A-5 Suhu anil

    ——Suhu anil terlalu rendah ——Meningkatkan suhu anil dengan tepat

    A-6 Siklus

    ——Terlalu banyak siklus ——Mengoptimalkan jumlah siklus

    Q: Berapa banyak template DNA yang harus ditambahkan dalam sistem reaksi PCR 50 l?
    ytry
    T: Bagaimana cara memperkuat fragmen panjang?

    Langkah pertama adalah memilih polimerase yang sesuai. Taq polimerase reguler tidak dapat mengoreksi karena kurangnya aktivitas eksonuklease 3'-5', dan ketidakcocokan akan sangat mengurangi efisiensi ekstensi fragmen. Oleh karena itu, Taq polimerase biasa tidak dapat secara efektif mengamplifikasi fragmen target yang lebih besar dari 5 kb. Taq polimerase dengan modifikasi khusus atau polimerase kesetiaan tinggi lainnya harus dipilih untuk meningkatkan efisiensi ekstensi dan memenuhi kebutuhan amplifikasi fragmen panjang. Selain itu, amplifikasi fragmen panjang juga memerlukan penyesuaian desain primer, waktu denaturasi, waktu ekstensi, pH buffer, dll yang sesuai. Biasanya, primer dengan 18-24 bp dapat menghasilkan hasil yang lebih baik. Untuk mencegah kerusakan template, waktu denaturasi pada 94°C harus dikurangi menjadi 30 detik atau kurang per siklus, dan waktu untuk menaikkan suhu ke 94°C sebelum amplifikasi harus kurang dari 1 menit. Selain itu, pengaturan suhu perpanjangan sekitar 68°C dan merancang waktu perpanjangan menurut kecepatan 1 kb/menit dapat memastikan amplifikasi efektif dari fragmen panjang.

    T: Bagaimana cara meningkatkan kesetiaan amplifikasi PCR?

    Tingkat kesalahan amplifikasi PCR dapat dikurangi dengan menggunakan berbagai DNA polimerase dengan fidelitas tinggi. Di antara semua Taq DNA polimerase yang ditemukan sejauh ini, enzim Pfu memiliki tingkat kesalahan terendah dan kesetiaan tertinggi (lihat tabel terlampir). Selain pemilihan enzim, peneliti selanjutnya dapat mengurangi laju mutasi PCR dengan mengoptimalkan kondisi reaksi, termasuk mengoptimalkan komposisi buffer, konsentrasi polimerase termostabil, dan mengoptimalkan nomor siklus PCR.

    Tulis pesan Anda di sini dan kirimkan kepada kami